对高效液相色谱仪（HPLC）而言，泵、色谱柱与检测器是核心，也是故障高发部位。作为高精密仪器，使用中的大部分问题集中在三类：柱压异常、基线问题与峰型异常。本文整理了一份可对照执行的排查顺序，供实验室日常快速定位问题。
一、柱压异常：偏高、偏低与不稳
柱压是液相色谱系统是否“通畅”的第一信号。排查柱压问题，建议遵循“由外到内、逐段隔离”的思路：先判断是系统问题还是色谱柱问题。
| 现象 | 常见原因 | 排查/处理方向 |
|---|---|---|
| 柱压持续升高 | 流动相未过滤脱气、样品未过滤，颗粒堵塞入口筛板 | 更换/超声清洗在线过滤器、吸滤头；纯水-甲醇（95:5）低速反冲色谱柱（不接检测器） |
| 柱压突然大幅升高 | 管路堵塞或缓冲盐析出结晶 | 分段排查：卸下色谱柱看系统压力，判断堵塞在柱内还是泵/进样器流路 |
| 柱压不稳、波动 | 泵单向阀污染、气泡进入、密封垫磨损 | 排空 purge 赶气泡；出口单向阀超声清洗；观察柱塞杆是否漏液 |
| 柱压偏低 | 系统漏液、接头未拧紧、泵头密封不良 | 检漏：目视/纸巾检查各接头，重点为泵头、进样器与柱两端 |
反冲色谱柱前务必卸下检测器连接，且只用能溶解污染物、与柱内保存液互溶的溶剂（反相柱常用 95:5 水-甲醇/乙腈），流速从 0.3–0.6 mL/min 起缓慢加大。不确定时可先咨询专业工程师。
二、基线问题：漂移、噪音与毛刺
- 基线向上漂移：多为流动相未平衡好、柱温箱温度未稳定、或检测器（如紫外灯）能量缓慢下降，先延长平衡时间并用等度条件验证。
- 基线噪音大：常见于脱气不充分（气泡进入流通池）、灯能量衰减超期、流通池窗口污染；对照检查流动相脱气、D2 灯使用时间（一般累计点燃 2000 小时后建议更换）、流通池清洗。
- 规则毛刺/脉冲：多与泵有关，如单向阀动作异常、泵密封圈磨损导致脉动，观察压力曲线同步判断。
三、不出峰、峰高特别低
若进样后什么峰都没有或峰高骤降，可按以下顺序排查：
- 检查液路是否正常、进样针是否吸入样品、进样阀是否切到 Inject 位；
- 确认检测器波长/增益设置未变，灯能量是否衰减；
- 检查色谱柱是否因长期使用柱效崩坏（可换一根同规格柱对比）；
- 样品是否降解或浓度过低、进样量设置是否被改动。
四、峰型异常速查
| 峰型 | 主要原因 | 处理方向 |
|---|---|---|
| 拖尾峰 | 柱头污染/塌陷、进样口或管路死体积、样品与固定相次级作用 | 柱再生或更换柱头填料；优化流动相 pH/缓冲盐 |
| 前沿峰（前伸） | 柱超载、样品溶剂过强 | 减少进样量、用接近流动相的溶剂溶解样品 |
| 分叉峰 | 筛板部分堵塞、柱头塌陷、柱入口有气泡 | 反冲+再生；必要时拆筛板清理（谨慎操作） |
| 峰变宽 | 柱效下降、系统死体积、流速异常 | 检查接头是否漏、柱再生或更换 |
五、给实验室的建议
大部分 HPLC“疑难杂症”源于日常维护不到位：流动相现配现用并过滤脱气、样品经 0.45 μm 滤膜、每周用适当溶剂冲洗系统、记录每根柱的使用与压力基线档案，可显著降低突发故障率。若已按本文顺序排查仍无法定位，或涉及泵头密封更换、检测器光路维护、主板报错等深度维修，建议交由专业工程师处理。
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